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免疫荧光技术简介

发布时间:2015-05-14作者:器械科编辑

免疫荧光技术(Immunofluorescence technique)又称荧光抗体技术,根据抗原抗体反应的原理,将荧光素偶联到已知的抗原或抗体上制成荧光探针,与血清或体液、细胞、组织中存在的相应抗体(或抗原)结合,从而对这些组织中存在的抗原或抗体进行定性、定量和(或)定位的检测。


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抗体的选择——用于荧光标记的抗体,应遵循以下几个原则:特异性强、高纯度、效价满意(>1:20),最好采用单克隆抗体。

荧光素的选择——用于抗体标记的荧光素需要具备以下条件:能够与蛋白质形成稳定的共价键;标记后不影响蛋白质和自身的生物学活性;荧光效率高,标记后荧光强度下降不明显;荧光色泽与背景色泽对比鲜明;标记方法简单、快速;安全无毒。

荧光抗体的保存——荧光抗体的保存原则是:防止抗体失活;保持荧光素不脱落和不淬灭。

免疫荧光技术的染色方法——免疫荧光技术的染色方法分为直接法和间接法。直接法的原理是将荧光标记的抗原/抗体直接与相应抗体/抗原反应,多用于流式细胞仪分析。直接法的优点是操作简便、特异性高,非特异性荧光染料少。但直接法的灵敏度偏低,而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体,若检测多种抗原需制备多种相应的荧光标记抗体。间接法的原理是先用未标记的抗体进行标记,使抗原抗体充分结合,然后洗涤,除去未结合的抗体;然后加上荧光标记的二抗,使之与已经结合在抗原上的一抗结合。


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